Biomarcadores chivatos de alteraciones en el Alzheimer de la vía apoE y el APP, su validación en modelos celulares (CHIVAT-AD)

Durante los últimos años hemos investigado alteraciones en varios procesos moleculares claves en la enfermedad de Alzheimer (AD), particularmente la vía de señalización apolipoproteína E(apoE) y el metabolismo del precursor amiloide APP; la aproximación fundamental ha sido el estudio de extractos de cerebro y de LCR de enfermos de AD. Aquí planteamos el desarrollo más profundo de la vertiente en biomarcadores y la validación de los hallazgos en modelos celulares humanos, células iPS; lo que permitirá la correcta interpretación de las alteraciones detectadas. Este modelo de iPSc se implementará con co-cultivos combinando líneas isogénicas de variantes, y KO, para APOE, lo que será de alta utilidad para descifrar la interacción neuronal-glial, particularmente en el contexto de la señalización defectuosa por apoE, la desregulación de la hiperfosforilacion de tau y el procesamiento patológico de β-amiloide. También validaremos con iPSc generadas de un paciente con mutación en ADAM10 la relevancia de insuficiencia en α-secretasa. En lo más concreto, centraremos nuestra atención en estudiar los niveles de las especies de apoE y de sus (co)receptores (apoER2, LRP3, Trem2, Sorl1, NMDA-R), APP (glicosilación y fragmentación), así como de secretasas (ADAM10, meprin β, BACE1, PS1 y sus interrelaciones). La aproximación del análisis electroforético y combinación de anticuerpos, específicos para dominios distintos, nos permitirá discriminar proteína completa de fragmentos. Las alteraciones en glicosilación de analizarán por interacción con lectinas. El caracterizar estos cambios también puede ser de interés en el desarrollo de nuevos biomarcadores, y refinar su determinación. Nuestra hipótesis última es que el desbalance de todas estas proteínas tiene un nexo común en la vía apoE, lo que lleva al progreso de la patología más allá de la presencia de un polimorfismo o variantes alélica (apoE4) como factor de riesgo.