Unitat Mixta de Microscòpia Electrònica CIPF‑ISABIAL

La Unitat Mixta de Microscòpia Electrònica CIPF‑ISABIAL està a disposició tant dels seus investigadors com d’altres institucions públiques i privades, oferint accés a tecnologies d’avantguarda per a l’anàlisi i preparació de mostres biològiques. Entre els serveis que ofereix la plataforma s’inclouen la congelació a alta pressió (HPF), la criosubstitució (ASF) i el tall automatitzat en sèrie de seccions ultrafines (ARTOS 3D). Aquestes tècniques permeten l’estudi ultraestructural detallat de material biològic —com ara cèl·lules, biòpsies o teixits animals i vegetals—, així com l’obtenció d’imatges tridimensionals mitjançant tomografia (Array Tomography).

La unitat també permet la correlació entre imatges de microscòpia electrònica i microscòpia de fluorescència, cosa que proporciona una visió integral de les mostres, combinant informació funcional i estructural. A més, el microscopi electrònic permet analitzar directament la morfologia de materials, complementant l’estudi amb tècniques espectroscòpiques per a la caracterització composicional.

• Assessoria metodològica per al processament de mostres biològiques per a la Microscòpia Electrònica.
• Congelació a alta pressió de les mostres (HPF).
• Criosubstitució i inclusió en resina epoxi o acrílica (ASF2).
• Fixació i inclusió de mostres a temperatura ambient en resina epoxi o Durcupan.
• Talls semifins amb l’ultramicrotom de material incrustat en resina per a l’avaluació mitjançant microscòpia òptica (Zeiss Axio Observer 7). Tenyicions amb colorant blau de toluidina i muntatge de mostres.
• Talls ultrafins en reixeta per a microscòpia electrònica STEM.
• Talls ultrafins seriats en oblea (wafer) de silici o cobres ITO per a Array Tomography (Volume EM).
• Maneig del microscopi de fluorescència invertit Zeiss Axio Observer 7 amb Apotome3.
• Maneig del microscopi FE‑SEM GeminiSEM 460 (Zeiss) en mode de rastreig o STEM.
• Assessoria en l’anàlisi d’imatges.

La Plataforma de Microscòpia Electrònica està especialitzada en microscòpia electrònica de rastreig per a mostres biològiques (Array Tomography i STEM), però estem oberts a totes les disciplines científiques. El nostre objectiu és proporcionar serveis d’EM d’alta qualitat, formació i accés a equips especialitzats per a tots els usuaris de l’ISABIAL, així com d’altres institucions públiques o privades.

Adaptem, optimitzem i desenvolupem mètodes ajustats a les seues preguntes científiques. Per favor, consulteu els equips i les tècniques que apareixen al web. Si teniu preguntes i/o voleu iniciar un projecte, poseu-vos en contacte amb la Plataforma de ME.

La Unitat Mixta de Microscòpia Electrònica CIPF‑ISABIAL està completament equipada per a la preparació avançada de mostres biològiques. Els processos inclouen fixació, post‑fixació, deshidratació i inclusió en resines epoxi o acríliques mitjançant motles de silicona. Aquestes resines proporcionen al material biològic la duresa i el suport necessaris per al seu tall mitjançant ultramicrotomia, obtenint‑se seccions semifines (0,5–2 µm) o ultrafines (60–100 nm) per a la seua posterior anàlisi microscòpica.

Un dels grans valors afegits de la plataforma és la incorporació de la tècnica de congelació per alta pressió (HPF, per les seues sigles en anglès), que permet preservar de manera excepcional l’ultraestructura de les mostres biològiques. Aquesta tècnica —encara poc estesa en la microscòpia electrònica convencional— congela el teixit a alta pressió evitant la formació de cristalls de gel, gràcies a la transició de l’aigua a un estat sòlid amorf. Combinada amb la criosubstitució i la inclusió en resina, la HPF permet obtindre una imatge altament fidel de l’estructura tissular.

A més, el laboratori permet l’adquisició de mosaics de seccions mitjançant microscòpia òptica, ja siga de talls realitzats amb vibratome o de seccions semifines tenyides amb blau de toluidina. Per la seua banda, el microscopi electrònic permet observar amb detall l’ultraestructura de les mostres. Per a millorar la interacció del feix d’electrons amb la mostra, es realitza un contrast amb metalls pesants com l’osmi, l’acetat d’urani o el citrat de plom, un pas fonamental per a la visualització de mostres biològiques.

Aquesta unitat també disposa d’un ultramicrotom d’última generació (Leica ARTOS 3D), capaç de realitzar talls seriats ultrafins (60–90 nm) de centenars o milers de seccions per a tècniques de tomografia per array. Aquestes seccions poden ser escanejades posteriorment amb el microscopi electrònic de rastreig Zeiss GeminiSEM 460, cosa que permet la reconstrucció tridimensional de les mostres.

A més, el laboratori està preparat per a realitzar microscòpia correlativa llum‑electró (CLEM). Gràcies als adaptadors disponibles, és possible escanejar una mateixa regió d’interés primer amb un microscopi de fluorescència invertit Zeiss Axio Observer 7 amb Apotome 3, i després amb el microscopi electrònic. Aquesta tècnica permet localitzar amb precisió senyals fluorescents dins de teixits o cèl·lules, en funció del marcatge específic. El sistema Apotome 3 millora la resolució mitjançant el seccionament òptic, eliminant la llum desenfocada i optimitzant la qualitat de la imatge en mostres vives o fixades.

La microscòpia electrònica 3D combinada amb HPF representa una eina clau en investigacions biomèdiques avançades, especialment en camps com les neurociències i el diagnòstic de malalties neurodegeneratives, incloses les neuropaties perifèriques hereditàries. Actualment, aquesta tecnologia no es troba disponible en altres àrees sanitàries ni universitats de la província d’Alacant.

La plataforma accepta mostres en qualsevol fase de preparació per a microscòpia electrònica, completant el procés segons les necessitats de l’investigador. En els casos en què només es requerisca l’ús del microscopi electrònic, l’usuari haurà de posar-se en contacte amb el laboratori i indicar la naturalesa de la mostra a analitzar.

La unitat de Microscòpia disposa d’un ampli equipament per al desenvolupament de les funcions requerides:

• Aparell de congelació per alta pressió o HPF (Leica EM ICE).
• Aparell de criosubstitució (Leica ASF2).
• Ultramicrotom (Leica ARTOS 3D).
• Fabricació de fulles de vidre per a l’ultramicrotom (Leica KMR3) i vibratome per al tall de material biològic (Leica VT1200).
• Microscopi Electrònic de Rastreig FESEM GeminiSEM 460 Zeiss.
• Microscopi de Fluorescència invertit Zeiss Axio Observer 7 amb Apotome 3.
• Programari i estacions de treball (workstations) per al maneig i estudi de les imatges obtingudes amb el microscopi (Atlas5 Array Tomography, ZEN Connect, Dragonfly, Fiji, MIB i Ilastik).

Tarifes Unitat Mixta de Microscòpia Electrònica CIPF‑ISABIAL